Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型高血压患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现呼吸道自身HIV到显现1型号肝炎诊断症状的成效率在学童时期就有很好的描述，多个呼吸道自身HIV白血病的学童中会有70%在肝细胞转换后10年内罹患肝炎，而随访15年的学童这一比率上升到84%。远比，分之一诊断1型号肝炎一半以上的型号1型号肝炎的复发机制还无法得到前提的研究成果。

越来越多的人开始用到分期系统会来并不一定1型号肝炎的成效：母基底在显现多种呼吸道自身HIV时转入第1过渡阶段，显现血糖反常时转入第2过渡阶段，显现症状时转入第3过渡阶段。一些多发呼吸道自身HIV白血病的母基底，在1期和2期，成效速度快，并发展为复发的1型号肝炎。我们以后描述了一小组在首次检测到多种呼吸道自身HIV取样后将近10年无肝炎的极很慢成效者，这小组患儿人数少，但特质非常完全一致。随后，我们发现呼吸道自身HIV酪氨酸CD8+T细胞会反不宜在成效加速的患儿中会基本不存在，但在现阶段复发和长期存在的肝炎患儿中会很容易检测到。这也许说明了，与成效患儿比起于，这些患儿致病反不宜的减缓增强。

晚期研究成果说明了，尽管减缓性T细胞会(Treg)数目正常，但肝炎患儿存在一些机制缺点，其中会仅限于对IL-2的反不宜能力降低。此外，肝炎患儿中会的效不宜CD4+T细胞会也许对减缓越来越具抵抗性，乏善可陈为效不宜T细胞会的减缓逼近，人为消除的Treg和基底外消除的正向Treg，以及HIV经历的CD4+T细胞会中会IL-2反不宜逼近。本研究成果的目的是描述了CD4+减缓性T细胞会(Treg)在在在极加速成效者中会的特质，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁不限住院的患儿亲属中会健康检查1型号肝炎的危险因素。我们以后描述了长期加速成效者的特质，他们保持多重呼吸道自身HIV白血病超过10年，但无法显现肝炎的诊断症状，很慢性或非完成性致病。随后，10名继续保持无肝炎并愿意提供大量血液取样的加速成效者纳入T和B细胞会机制研究小组。在迄今为止的研究成果中会，8名很慢成效者(SP小组)，中会位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的呼吸道自身HIV白血病。所有的参与者都处于1型号肝炎成效的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身HIV对某些HIV的白血病反不宜，然而，一名患儿已经处于2期将近6年，但无法显现诊断症状，一名患儿被诊断为肝炎，该实验者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据研究小组中会对该NADP完成了基本上评估。剥离外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会绝技和T细胞会减缓实验评估NADP中会Treg的振幅、表现型号和机制。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)完成无指派聚类研究小组，评估Treg表现型号。

结果：与健康NADP比起于，来自很慢成效基底的潜意识CD4+T细胞会的指派聚类看出，激活的潜意识CD4+ Treg振幅上升，与小组胺正向的TNFR相关蛋白(GITR)暗示上升有关。一名HbA1c升高的患儿与成效加速者和匹配的对照小组比起于，Treg小曲有所相同。机制研究小组说明了，与健康NADP比起于，来自加速成效基底的Treg介导的CD4+效不宜T细胞会减缓明显受损。乏善可陈为对效不宜CD4+T细胞会CD25和CD134暗示的减缓上升。

布1 深入的表现型号研究小组看出，CD4+Treg亚型号在很慢成效表头中会上升。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物暗示鉴定出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)用到9个相同Treg上面聚合的10个元簇的MST。每个节点亦然一个坦克部队(100个坦克部队)，越来越大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点小组远处上色。每个节点中会的甜品布坚称单个上面的暗示级别。(b)每个元聚类的热布，以看出整基底上面暗示。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)聚合布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起金属量为每个metacluster罐终点站布(金属量> 0.05%)确定为HD和SP小组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。红色边框亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用到CITRUS的预测模型号证实，Treg振幅的上升是成效加速的标志。分级相关联(a - f)和柑橘研究小组(g-k)尤其SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的歧异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的亦然性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示完成剥离，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(布氏)小组以及NADPSP 606(红色)中会CD25+ cd127的振幅汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联偏序的罐终点站布;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD表头两者之间的相同。(j)罐终点站布看出了在SP(布氏)和HD(灰点)小组中会，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的比起金属量(比率)。(k)直方布看出每个簇的表现型号(暗红色)和Treg上面比起暗示与氛围暗示(深蓝色);上列，线程Treg_3;请注意一行，线程Treg_4。氛围与所有其他簇中会上面的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

布3 与健康献血者比起于，成效加速者潜意识treg的GITR上升。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个暗示上面的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的暗示热布(sp606不仅限于在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中会所有HD(黑色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR暗示串联，看出直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(红色)所有NADP仅限于，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和匹配的HD不仅限于在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR暗示，从分级相关联，从所有HD(黑色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(红色)串联，看出直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

布4 来自加速成效的CD4+ treg细胞会控制效不宜CD4+T细胞会的能力降低。SP小组用深蓝色的终点站和边框坚称，HD小组用紫色的终点站和边框坚称，红色的终点站/边框坚称NADPsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(不宜答者)被上面为CFSE, Treg按注意到的比率滴定。用抗CD3 /28微珠增殖细胞会，培训3天后完成流式细胞会绝技检测。(a-d)与CD4+不宜答者比起不宜的treg培训(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不宜答者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓比率。用到白血病对照(激活的响不宜细胞会不含treg)量化减缓比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究小组。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

布5 效不宜CD4+T细胞会对加速成效的T细胞会增殖的减缓越来越适合于。SP小组用深蓝色的终点站和边框坚称，HD小组用紫色的终点站和边框坚称，红色的终点站/边框坚称NADPsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会完成分选。CD4+CD25−(不宜答者)被cfsel上面，treg按注意到的比率滴定。用抗CD3 /28微珠增殖细胞会，培训3天后完成流式细胞会绝技(CD25反染)和细胞会因子研究小组。HD Treg与HD、SP或sp606不宜答者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中会的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究小组。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

结论：我们量化出来的结论是，来自加速成效子的增殖潜意识CD4+Treg在GITR暗示中会得到了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1型号肝炎风险母基底中会的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28