Diabetologia：激活但机能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现成来人体内自身抗质到显现成来1型式冠心病检验腹泻的方面百余人在儿童中期就有极佳的叙述，多个人体内自身抗质阴性的儿童以后有70%在血清反转后10年内患上冠心病，而随访15年的儿童这一分之一减少到84%。比起之下，分之二检验1型式冠心病一半以上的型式1型式冠心病的病症机制还没有人给予更加进一步的研究课题。

越来越多的人开始用于分期系统来定义1型式冠心病的方面：形态在显现成来多种人体内自身抗质时进到第1期中，显现成来体温异常时进到第2期中，显现成来腹泻时进到第3期中。一些多发人体内自身抗质阴性的形态，在1期和2期，方面较快，并发展为病症的1型式冠心病。我们以后叙述了一组成员在首次健康检查到多种人体内自身抗质结果显示后至少10年无冠心病的快得多方面者，这组成员病症人数少，但特征非常明确。随后，我们发掘成人体内自身抗原依赖性CD8+T蛋白质子化在方面减慢的病症以后基本不普遍存在，但在近期病症和长期普遍存在的冠心病病症以后很较易健康检查到。这可能暗示，与方面病症比起，这些病症免疫质子化的调节大幅提高。

早期研究课题暗示，尽管调节性T蛋白(Treg)数量正常，但冠心病病症普遍存在一些功用缺陷，其以后包括对IL-2的质子化战斗能力下降。此外，冠心病病症以后的震荡CD4+T蛋白可能对调节更加具抵抗性，发挥为震荡T蛋白的消除减弱，自然转化成的Treg和质外转化成的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白以后IL-2质子化减弱。本研究课题的目的是叙述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群极减慢方面者以后的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁表列成确诊的病症亲属以后健康检查1型式冠心病的危险因素。我们以后叙述了长期减慢方面者的特征，他们保有多重人体内自身抗质阴性超过10年，但没有人显现成来冠心病的检验腹泻，慢性或非展开性免疫。随后，10名继续保有无冠心病并愿意提供大量血清结果显示的减慢方面者纳入T和B蛋白功用系统性。在目前的研究课题以后，8名慢方面者(SP组成员)，以后位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的人体内自身抗质阴性。所有的旁观者都保有稳定1型式冠心病方面的1期，尽管一些人随后失掉了人体内自身抗质对某些抗原的阴性质子化，然而，一名病症已经保有稳定2期至少6年，但没有人显现成来检验腹泻，一名病症被检验为冠心病，该受试者72岁，在采集实验结果显示时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在统计系统性以后对该诱导展开了单独检验。受控外周血单个连锁反其所蛋白(PBMCs)，采用多表达式流式蛋白术和T蛋白消除试验检验诱导以后Treg的振幅、遗传基因式和功用。用于FlowSOM和CITRUS(聚类认定、总括和回归)展开无监督聚类系统性，检验Treg遗传基因式。

结果：与肥胖诱导比起，来自慢方面质的无意识CD4+T蛋白的监督聚类暗示，酪氨酸的无意识CD4+ Treg振幅减少，与利尿剂诱导的TNFR相关复合物(GITR)解读减少有关。一名HbA1c上升时的病症与方面减慢者和也就是说的依此组成员比起，Treg谱有所完全相同。功用得成正确性，与肥胖诱导比起，来自减慢方面质的Treg诱导的CD4+震荡T蛋白消除相比受损。发挥为对震荡CD4+T蛋白CD25和CD134解读的消除减少。

三幅1 透彻的遗传基因式得成正确性，CD4+Treg甲型式在慢方面字段以后减少。由FlowSOM降解的Treg三楼，汇聚在来自所有诱导的来时CD4+CD45RA -蛋白上。根据标上物解读认定成10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用于9个完全相同Treg标上降解的10个元簇的MST。每个键值代表一个空降兵(100个空降兵)，更加大的元空降兵(10个元空降兵)在键值组成员周围上色。每个键值以后的糕点三幅透露单个标上的解读级别。(b)每个元聚类的热三幅，以暗示整质标上解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)降解三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起同位素为每个metacluster箱内以后央线三幅(同位素> 0.05%)明确为HD和SP组成员:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。粉红色带子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的估测式证实，Treg振幅的减少是方面减慢的标志。分级离子通道(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP旁观者和也就是说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的标志性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读展开受控，模拟器FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及诱导SP 606(粉红色)以后CD25+ cd127的振幅概要三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的箱内以后央线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读数值着色，箭头突成的簇被标识为SP和HD字段中间的完全相同。(j)箱内以后央线三幅暗示了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员以后，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比起同位素(分之一)。(k)直方三幅暗示每个簇的遗传基因式(粉红色)和Treg标上比起解读与背景解读(浅蓝色);上列，闪存Treg_3;下面动身，闪存Treg_4。背景与所有其他簇以后标上的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与肥胖献血者比起，方面减慢者无意识treg的GITR减少。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)健康检查每个解读标上的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的解读热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇以后所有HD(粉红色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR解读串联，暗示直方三幅(c)和概要三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有诱导包括，p< 0.05(浅蓝色)诱导SP 606和也就是说的HD不包括在测试以后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs以后GITR解读，从分级离子通道，从所有HD(粉红色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(粉红色)串联，暗示直方三幅(e)和概要三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自减慢方面的CD4+ treg蛋白控制震荡CD4+T蛋白的战斗能力下降。SP组成员用浅蓝色的以后央线和带子透露，HD组成员用黑色的以后央线和带子透露，粉红色的以后央线/带子透露诱导sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按观察的分之一起始。用抗CD3 /28微珠增殖蛋白，人才3天后展开流式蛋白术健康检查。(a-d)与CD4+反之亦然者比起其所的treg人才(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除平均值。用于阴性依此(酪氨酸的叛离蛋白含treg)数值消除平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 震荡CD4+T蛋白对减慢方面的T蛋白增殖的消除更加敏感。SP组成员用浅蓝色的以后央线和带子透露，HD组成员用黑色的以后央线和带子透露，粉红色的以后央线/带子透露诱导sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按观察的分之一起始。用抗CD3 /28微珠增殖蛋白，人才3天后展开流式蛋白术(CD25反染)和蛋白因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者联合人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除前年(b)。(c,d) CD25消除前年(c)和CD134消除前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才以后的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得成的正确性是，来自减慢方面子的增殖无意识CD4+Treg在GITR解读以后给予了扩展和丰富，强调了进一步研究课题Treg在1型式冠心病安全性形态以后的异质性的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28